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二代测序仪的操作流程

  北京拓普塞斯生物技术有限公司成立于 2008 年，是湖北三七七生物技术有限公司的全资子公司，我司自成立至今始终致力于各种类型的生物学仪器的销售、维修维护等服务。如测序仪、合成仪、扩增仪、蛋白纯化仪、自动工作站和气相色谱质谱联用仪等，dna测序仪报价，公司尤其在 ABI 各种型号的基因分析仪方面有丰富的维修维护经验。

    1）测序文库的构建（Library Construction）

　　首先准备基因组DNA（虽然测序公司要求样品量要达到200ng，但是Gnome Analyzer系统所需的样品量可低至100ng，能应用在很多样品有限的实验中），然后将DNA随机片段化成几百碱基或更短的小片段，并在两头加上特定的接头（Adaptor）。如果是转录组测序，dna测序仪代理商，则文库的构建要相对麻烦些，RNA片段化之后需反转成cDNA，然后加上接头，或者先将RNA反转成cDNA，然后再片段化并加上接头。片段的大小（Insert size）对于后面的数据分析有影响，可根据需要来选择。对于基因组测序来说，通常会选择几种不同的insert size，以便在组装（Assembly）的时候获得更多的信息。

　　2）锚定桥接（Surface Attachment and Bridge Amplification）

　　Solexa测序的反应在叫做flow cell的玻璃管中进行，flow cell又被细分成8个Lane，每个Lane的内表面有无数的被固定的单链接头。上述步骤得到的带接头的DNA 片段变性成单链后与测序通道上的接头引物结合形成桥状结构，以供后续的预扩增使用。

　　3）预扩增（Denaturation and Complete Amplification）

　　添加未标记的dNTP 和普通Taq 酶进行固相桥式PCR 扩增，单链桥型待测片段被扩增成为双链桥型片段。通过变性，释放出互补的单链，锚定到附近的固相表面。通过不断循环，将会在Flow cell 的固相表面上获得上百万条成簇分布的双链待测片段。

　　4）单碱基延伸测序（Single Base Extension and Sequencing）

　　在测序的flow cell中加入四种荧光标记的dNTP 、DNA 聚合酶以及接头引物进行扩增，在每一个测序簇延伸互补链时，每加入一个被荧光标记的dNTP就能释放出相对应的荧光，测序仪通过捕获荧光信号，并通过计算机软件将光信号转化为测序峰，从而获得待测片段的序列信息。

　　5）数据分析（Data Analyzing）

　　这一步严格来讲不能算作测序操作流程的一部分，但是只有通过这一步前面的工作才显得有意义。测序得到的原始数据是长度只有几十个碱基的序列，要通过生物信息学工具将这些短的序列组装成长的Contigs甚至是整个基因组的框架，或者把这些序列比对到已有的基因组或者相近物种基因组序列上，并进一步分析得到有生物学意义的结果。

北京拓普塞斯生物专注测序仪销售与维修服务，主营产品型号：有373测序仪、377测序仪、310测序仪、3700测序仪和3100测序仪型等dna测序仪。

测序仪之分离胶

北京拓普塞斯生物技术有限公司成立于 2008 年，是湖北三七七生物技术有限公司的全资子公司，我司自成立至今始终致力于各种类型的生物学仪器的销售、维修维护等服务。如测序仪、合成仪、扩增仪、蛋白纯化仪、自动工作站和气相色谱质谱联用仪等，公司尤其在 ABI 各种型号的基因分析仪方面有丰富的维修维护经验。

分离胶

3130 POP-7?、POP-6? 和 POP-4? 三种分离胶（性能优化分离胶）均可以在美国应用生物系统公司的 3130 和 3130xl 基因分析仪上用作分离介质。在每次分析之前，毛细管自动使用新胶进行补充，这些新胶动态覆盖毛细管壁，以*电渗流。

测序仪注意事项

  北京拓普塞斯生物技术有限公司成立于 2008 年，是湖北三七七生物技术有限公司的全资子公司，我司自成立至今始终致力于各种类型的生物学仪器的销售、维修维护等服务。如测序仪、合成仪、扩增仪、蛋白纯化仪、自动工作站和气相色谱质谱联用仪等，公司尤其在 ABI 各种型号的基因分析仪方面有丰富的维修维护经验。

1．abi prism 310基因分析仪是专业精密仪器，需专人操作、管理和维护。2．本实验测序pcr反应的总体积是5μl，而且未加矿物油覆盖，dna测序仪厂家，所以pcr管盖的密封性很重要，除加完试剂后盖紧pcr管盖外，选用pe公司的pcr管。如pcr结束后pcr液小于4～4.5μl，则此pcr反应可能失败，北京测序仪，不必进行纯化和上样。3．作为测序用户来说，只需提供纯化好的dna样品和引物，一个测序pcr反应使用的模板不同，需要的dna量也就不同，pcr测序所需模板的量较少，一般pcr产物需30～90ng，单链dna需50～100ng，双链dna需200～500ng，dna的纯度一般是a260nm/a280nm为 1.6～2.0，用去离子水或三蒸水溶解dna，不用te缓冲液溶解。引物用去离子水或三蒸水配成3.2pmol/μl较好。4．本实验使用的测序试剂盒是bigdye荧光标记终止底物循环测序试剂盒，一般可测dna长度为650bp左右。本仪器dna测序准确度为 (98.5±0.5) %，仪器不能辨读的碱基n<2%，所需测定的长度**过了650bp，则需设计另外的引物。为保证测序更为准确，可设计反向引物对同一模板进行测序，相互印证。对于n碱基可进行人工核对，有时可以辨读出来。为提高测序的准确度，根据星号提示位置，可人工分析该处图谱，对该处碱基作进一步核对

北京拓普塞斯生物专注测序仪销售与维修服务，主营产品型号：有373测序仪、377测序仪、310测序仪、3700测序仪和3100测序仪型等dna测序仪。欢迎您致电联系我们获取更多优惠~~~