非洲猪瘟病毒荧光PCR试剂盒 农业部*非洲猪瘟试剂盒

核酸DNA提取试剂盒（柱膜法）使用说明书

【产品名称】

通用名称：病毒DNA提取试剂盒

英文名称：Extraction Kit for Virus DNA

【预期用途】

本试剂盒主要用于疑似病毒等病原感染抗凝血、血淸、拭子、组织、饲料及环境中的病毒DNA的提取，纯化的核酸可适用于各种常规操作及PCR试验。

【试剂盒组分】

I、试剂盒组成及贮藏条件

2、 保存条件及有效期：室温下保存，有效期12个月.

3、 需自备材料：无水乙醇、1.5 mL无菌离心管、1.5 mL无菌离心管（长臂型）、生理盐水、研钵、无菌

1mL, 2OOuL、10uL枪头、记号笔等。

【操作步骤】

一、样品制备

1、 血液样品：抗凝血样品置离心管中，8000转/分钟离心2分钟，取上层血浆；非抗凝血样品置离心 管中，待凝固后，8000转/分钟离心2分钟，取上层血清，置于灭菌离心管中，编号待检。

2、 组织样品：采集脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体等病变组织样品0.1g.组织匀浆器或研钵中充分匀浆或研磨，加入1 mL生理盐水混匀，8000转/分钟离心2分钟，取上清于灭菌离心骨中，编号待检。

3、 口腔液：进食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉线绑纱布团吸引动物咀嚼，收集口腔液大于 500uL， 8000转/分钟离心2分钟，取上清于灭菌离心管中，编号待检。

4、 饲料：取适量研磨后的饲料（约0.2g），放入含1 mL生理盐水或PBS（PH为7.4）缓冲液的2 mL EP 管屮，振荡混匀，8000转/分钟离心2分钟，取上清于灭菌离心管中,编号待检.

5、 灰尘：用无菌棉签蘸取适量环境表面上的灰尘，放入含1 mL生理盐水或PBS（PH为7.4）缓冲液的2 mL EP管中，振荡混匀，8000转/分钟离心2分钟，取上清于灭菌离心管中，编号待检。

二、DNA的提取

1、取裂解液200uL加入无核酸酶1.5 mL离心曾屮，分别加入血浆/血清/组织液等样品液200uL. 震荡混匀10秒或颠倒混匀10次，室温放置5分钟（如果室内温度较低时.需放置25C水浴温育），再加入200uL无水乙醇，颠倒混匀10秒；若样品浑浊则先12000转/分钟离心1分钟处理，取上清液，以避免堵塞柱子；

2、 将液体转入套有收集管的吸附柱中， 12000rpm离心1分钟：

3、 弃收集管液体，向吸附柱中加600uL洗液I , 12000 rpm离心1分钟;

4、 弃收集管液体，向吸附柱中加600uL洗液II， 12000 rpm离心I分钟；

5、 弃收集管液体，12000 rpm离心2分钟，以彻底去除残留洗液；

6、将吸附柱转入新的无核酸酸1.5mLEP管（长臂型）中，向柱*滴加50 uL洗脱液，静置1分钟, 12000 rpm离心1分钟，EP管中液体即为病毒DNA。

【注意事项】

1、 实验前诺仔细阅读本试剂盒说明书，严格按照操作步骤执行.在操作过程中对时间、试剂体积等 粘确控制可以获得的结果。

2, 样本应新鲜采集使用，或低温运输储存；

3, 样本具有潜在感染风险，核酸的提取应在核酸提取实验室的生物安全柜中进行。

4、 核酸提取冇关耗材确保高温灭菌，提取后核酸尽快进入下一步试验或冷冻保存待用。

5, 试剂使用前应混合均匀，试剂具有一定腐蚀性，使用时请戴手套、口罩做好防护。

6. 低温下裂解液出现结晶数属正常现象，可在60°C水浴加热助溶后使用。

7、 实验产生的废弃物应及时收集，远离PCR实验室进行无害化处理。

仅供兽医诊断使用