细菌染色液是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
 

细菌染色液为碱性染料这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性细菌染色液在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性细菌染色液的染色部分很容易与细菌结合使细菌着。染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
 

细菌染色液的具体操作步骤：
 

1、涂片

a、取一块干净的载玻片，平放，在载玻片*滴一小滴生理盐水。

b、用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔。

c、将挑取的菌苔沾入载玻片*生理盐水中混匀并涂成薄膜。
 

2、干燥

将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。也可用电吹风低温吹干。
 

3、固定

手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次。

原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固，从而固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。

4、染色

将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，滴加染液于涂片上。

染色时间：吕氏碱性美蓝染色1~2min;石炭酸复红染色约1min;草酸铵结晶紫染色约1min。
 

5、水洗

将细菌涂片上染液倒入废液缸中；手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。
 

6、干燥

自然干燥：平放于室温，自然干燥。

吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干。

吸干：平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。