TwistDx 的重组酶聚合酶扩增（RPA）将彻底改变在资源有限的现场环境中扩增和检测核酸的能力。

RPA 技术原理

RPA 体系的重点是重组酶，这些酶与寡核苷酸引物形成复合体，并使引物与双链 DNA 中的同源序列配对。单链 DNA 结合（SSB）蛋白与被取代的 DNA 链结合，并使形成的 D 环保持稳定。然后从引物启动由聚合酶介导的 DNA 扩增，但前提是存在靶标序列。一旦启动，扩增反应将快速进行，因此开始时只需一点靶标 DNA 拷贝数，高特异性 DNA 扩增在数分钟内即可达到可检出水平。

RPA 循环

RPA 的技术特点

为什么选择 RPA 方法?

◇ 速度

RPA 非常快速，在 37～42 °C 这一通常较适宜的反应温度下，只需少量核酸分子即可在 3～10 分钟（通常）内扩增至可检出水平，但这将取决于靶标大小。在大部分情况下，只需要一个人即可在半小时内采集样本、制备样本、运行检测并取得结果，并且*专业培训。

◇ 灵敏度

RPA 可检测复合样本中的单拷贝 DNA 和 10 拷贝甚至更少 RNA，而*预先纯化核酸。

◇ 特异性

RPA 具有高度特异性，该技术可从可能含有数百纳克来自多个不同物种的不相关复合基因组 DNA（包括人 DNA）的样本中识别并扩增单个 DNA 分子，抗干扰能力强。

◇ 恒温运行

RPA 在恒定的低温（37～42 °C 较适宜）下运行。对于某些应用，如果需要，即便体温也可支持 RPA 扩增。该反应在偏离温度及低温设置下也表现稳健，即使在常规室温 25 °C 下也将奏效，虽然反应速度会下降; 在此温度下，只要此生物化学过程被正确配置，仍可在一小时内获得结果。

◇ 样本容差

RPA 对样本类型的要求宽松，有时可直接检测未经核酸纯化的原始样本，例如血液、鼻拭子或培养基。通常，只需采用基本的病原体裂解方法处理样本以释放核酸即可，例如热处理或弱碱处理。每种检测所需的较合适的样本制备方法取决于病原体滴定度、是否存在抑制剂以及裂解要求等因素，并将需要设计到检测程序中。RPA 对某些复合样本类型的宽容性使该技术非常适合广泛的现场实地应用。

◇ 广泛的适用性

RPA 能够方便地应用于任何 DNA 或 RNA 靶标，无序列偏好性，这一点对于 NGS 尤其重要。如果将逆转录酶添加到反应混合液中开发出了**高灵敏度的 RNA 一步检测法。

◇ 多重检测

通过将多种引物同时添加到同一反应管中，单次 RPA 测试即可扩增和检测多种不同的靶标。

◇ 低设备成本

RPA 仅需要基本的检测设备，也就是说，较终用户可以使用 RPA 技术开发出适合各种应用和环境的人性化诊断方法和试剂盒。

◇ 灵活的试剂形态

核心反应组分能够以稳定的干燥形态供货，该形态易于运输，且*冷藏即可储存较多 12 个月（稳定性可能因用途不同而有变化，因此仍建议在冷藏条件下长期储存），也能够以 PCR 试剂更常见的液体形态供货，该形态允许用户针对特定的应用改变反应体积和组分比例。

◇ 多种检测形式

RPA 可应用于各种检测系统和仪器，包括实时荧光探针和夹心法等形式。

RPA 与 其他核酸扩增方法 PCR 及 LAMP 的比较

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