生物缓冲液常用于生物化学研究实验当中,具有较为重要的意义,是一类能够抵制外界少量强酸和强碱的影响,维持PH值基本不变的调节液。其中经常使用的生物缓冲液有Tris 缓冲溶液、PBS缓冲溶液、CAPS缓冲液、MOPS缓冲液、TAPS缓冲液以及EPPS缓冲液。本文将从几个方面对较常使用的Tris缓冲溶液和PBS缓冲溶液进行对比介绍。
1.缓冲范围
三羟(Tris)为弱碱,分子式为C4H11NO3,分子量为121.14,在25 °C下pKa为8.1,其缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0~9.2之间。在生物化学实验中常用的pH值为6.8、7.4、8.0、8.8。Tris被广泛用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备,甚至有**过盐缓冲液的趋势。
盐缓冲液(PBS)是以盐为pH缓冲,氯化为渗透压平衡的盐溶液,通常使用的有缓冲液和缓冲液。由于它们有二级解离,缓冲的pH值范围很广,是生物化学研究中使用较为广泛的一种缓冲溶液。
2.配置方法
配制Tris-HCl缓冲液的方法有两种:分别配制 Tris和 HCl溶液,然后按常用表中所列体积混合即可。但是由于标准浓度的稀不易配制,所以常用另一种方法:以配置Tris-HCl缓冲液为例:先将 Tris碱溶于950 mL~970 mL 去离子水中,边搅拌边滴加 HCl,用pH计测定溶液pH值至所需的pH值,然后再加水进去即可。
盐缓冲溶液的配制方法: 称 NaCl, KCl, KH2PO4和K2HPO4,溶于800 mL 蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4 ℃冰箱中即可。需要注意的是,通常所说的浓度指的是缓冲溶液中所有的根浓度,而非Na+或K+的浓度,Na+和K+只是用来调节渗透压的。配置盐缓冲溶液时盐比盐好,盐在低温下不容易溶解,而盐的溶解度相对高一些。
3.使用领域
Tris缓冲溶液 在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系稳定pH值;在凝胶中使用Tris-HCl缓冲体系稳定pH值;被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂;Tris缓冲液的低离子强度特点还可用于线虫的中间纤维的形成;在Tris缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”,可用于DNA的稳定和存储;将调节pH值的酸溶液换成,获得“TAE缓冲液”,换成可获得TBE缓冲液。这两种缓冲液常用于核酸电泳实验中。
盐缓冲溶液 一般的有活性的生物制剂都要用盐缓冲溶液来稀释。原因就是它具有盐平衡、可调整适宜pH值的缓冲作用。蒸馏水不具有盐平衡作用,会破坏生物蛋白的结构及生物特性;生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、有活性的物质不能保证其在较适条件下参与生物反应,所以使用PBS是可以选择。当然,PBS也不是**的,有的生物活性物质需要的条件比较高,就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分,维持较佳的条件保证生物活性物质保持其较完整的特性。因此PBS主要用于细胞实验,其缓冲范围较适宜在中性。
在生物化学实验中要慎重地选择缓冲溶液,不仅要考虑缓冲液的缓冲范围,还要综合考虑缓冲液的使用环境。湖北新德晟材料专业生产研发生物缓冲液已有多年,德晟拥有独立的研发团队,对产品的研发生产已有十分丰富的实战经验。目前德晟出品的生物缓冲液等产品,已销往**多个国家,均收到**复购,与众多国外客户达成长期合作。如果你有意向了解的话,可以来电咨询,德晟欢迎您的来电。
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