1. 基本性质
类化合物应用于化学发光检测具有以下优点:
① 背景发光低,信噪比高;
② 发光反应干扰因素少;
③ 光释放快速集中、发光效率高、发光强度大;
④ 易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少;
⑤ 标记物稳定(在2-8℃下可保存数月之久),它们在水中溶解性好,稳定且不易水解。(酯通常不用水溶解)
类化合物化学发光不需要催化剂,在有H2O2 的稀碱性溶液中即能发光。化合物的发光为闪光型,加入发光启动剂后一般0.5s 左右发射光强度达到zui大,半衰期为1s左右。
类化合物应用于化学发光*分析(CLIA)。即用盐标记抗体或抗原,用HNO3+ H2O2 和NaOH 作发光启动试剂。有些在发光启动试剂中加入Triton X-100,CTAC,Tween-20等表面活性剂以增强发光。
类化合物常用于环境分析、*分析、酶活性分析和标记寡核苷酸片段等,在临床上用于测定细菌、病毒或其它疾病标志物。
2. 酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS
酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS是一种理想的化学发光*分析标记物质,具有良好的发光性能。与目前广泛使用的酯AE-NHS相比,酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS与抗体(Ab)偶联物的发光强度更高,酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS为1.03´107cps/ng,而AE-NHS为1.0´105cps/ng Ab,两者的发光动力学性质很相似,都为闪光型发光且都 是在0.4s时达到zui高,但DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS的热稳定性较AE-NHS显著提高,AE-NHS只在酸性溶液中稳定,当pH>6.3后易水解,而DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS则不然,如在室温下,在pH为7.0的PB缓冲液中很稳定,16天后,发光活性只降低3.6%。它们与蛋白偶联物的发光热稳定性情况与此相似。
酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS易于标记生物分子且标记后化合物的发光活性及生物活性稳定,以所合成的为发光标记物应用于化学发光*分析具有很高的灵敏度和其它理想的方法学指标,如对TSH的较低检测限达0.007 mIμ/L。因此,酯DMAE-NHS或NSP-DMAE-NHS对于研究化学发光分析以及化学发光*分析均具有很好的应用价值。
3. 磺酰胺NSP-SA-NHS
磺酰胺NSP-SA-NHS是一种非常有效的化学发光*分析标记物质,它具有空间位阻大,水解稳定性好,热稳定性和信噪比高等性质。它的光**产率也优于酯AE-NHS。应用于直接化学发光分析及化学发光*分析等具有许多优点。
磺酰胺NSP-SA-NHS化学发光不需要催化剂,在有H2O2的稀碱性溶液中即能发光,具有许多优越性,特别是无须一个催化过程,也不需要增强剂,从而降低了背景发光,提高了信噪比,干扰作用少。该类化合物作为化学发光*分析的发光标记物,还具有其它方面的优点,如光释放快速集中、发光效率高、发光强度大,易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少、标记物稳定,在2-8℃下可保存半年以上。
磺酰胺NSP-SA-NHS的稳定性较酯类如AE-NHS高,其原因是由于C-N键与C-O键的键级不同,C-N键大于C-O键。酰胺类化合物抵抗水解的能力也强于酯类化合物。
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