hepes buffer是指的HEPES缓冲剂,HEPES就是2-(4-(2-羟乙基)哌嗪)乙磺酸,CAS号7365-45-9。这种缓冲剂通常用于生物化学实验中,调节反应体系的pH值,像病毒保存液或者细胞保存液中就含有这个成分。
市场上的羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES有粉末试剂和溶液试剂两种类型。HEPES溶液的使用浓度为10-50mmol/L,一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。而且这种缓冲液有许多优于磷酸缓冲液的性能,对细胞无毒性作用,能长时间控制恒定的pH范围,是一种良好的氢离子缓冲剂。
hepes buffer的解离常数是7.65(20摄氏度下),pH缓冲范围是6.6-8.6,一般适用于pH为6.8-8.2的反应体系。它即可以直接与氢氧化钠一起直接使用,也可以与盐混合再用氢氧化钠调节pH后使用。
一、500ml的1mol/L HEPES,pH为7.0,stock solution: 称量0.5摩尔(119.15g)羟乙基哌嗪乙磺酸,再用0.5M~1M的氢氧化钠调节至所需pH值,后蒸馏水定容即可,于4摄氏度下密封保存。
二、加少量盐的HEPES buffer 500mL: HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值,后定容并低温保存。
三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制:将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5M NaOH调节至所需pH值,再用蒸馏水定容至100ml即可。
HEPES的缓冲液体系虽然不如磷酸盐缓冲液PBS广泛,但它有多优点,PBS的离子强度**HEPES,而离子强度会影响混合溶液中其它溶质的的溶解度。通常PBS能用的地方HEPES可以使用,而使用HEPES的地方PBS通常不能代替。
HEPES缓冲剂与PIPES比较相似,不过PIPES水溶性较差可以制成PIPES钠盐。德晟提供的这两种缓冲剂都是粉末试剂,如果有要求也可以配制成特定浓度的即用型缓冲溶液。
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