羊绒羊毛鉴别又出新招
记基于DNA拉术的羊绒羊毛**定性定量检测方法的建立及应用
另辟蹊径 从根源解决纤维鉴别问题
羊毛羊绒的定量,关键是要将羊绒羊毛混合物的重量比例与山羊绵羊DNA的量之间建立起一条定量的标准曲线。“我们分析了美国国立生物信息中心(NCBI)数据库中山羊和绵羊的线粒体序列,找到了种内相同、种间差异大的区域,设计了相应的引物和探针,用于检测各物种DNA的量。” 孙美蓉说。
能否得到纯度和完整性均高的DNA是该方法的关键。为此,项目组尝试了很多文献报道的蛋白纤维DNA裂解方案,并做了各种改进,希望可以将角蛋白*裂解。
费静说:“将纤维剪碎,可增加其与裂解液的接触面积,但一般的粉碎机无法胜任,只能通过人工用剪刀剪。1克纤维在一个小烧杯内,用一把手术剪将其剪碎到面粉一样的效果,需要剪无数次。”为了**羊毛和羊绒是被剪碎到相同的程度,需将样品混合不同的比例再进行剪碎,每个比例又要有重复的样品,费静的手指上磨出了水泡。大家得知了这一情况后,自告奋勇轮流进行“剪毛行动”。唐敏峰研究员更是调动中心上下技术*,集思广益,尝试各种样品的粉碎手段。在不断尝试后,项目组发现冷冻研磨机可以很好地粉碎纤维,这样就大大节省了劳力。
当项目组克服重重困难,建立起定虽的标准曲线后,新问题又来了。“我们的研究都是建立在线粒体DNA上,而线粒体在不同物种、不同组织、不同生长时期的数目可能会发生变化,这就带来了新的问题。特种动物纤维毛发中的线粒体数目是否稳定,是关系到我们定量标准曲线准确度的大问题费静说道。
为了确认这个方法是否可行,项目组两次深入新疆采集样品。在采样途中,项目组成员还碰上几十年一遇的沙尘暴,感受了车子拋锚在戈壁滩**待救援的无奈。较终在一户农家采集到了1~6岁山羊绒的样品。“功夫不负有心人,验证的结果表明,不同产地、不同年龄段的山羊绒,其所携带的线粒体拷贝数是稳定不变的,这样我们的定呈标准曲线就有了实际样品检验的支撑。”孙美蓉说。
项目组还收集了很多平时检测时遇到的羊绒羊毛样品,对该方法进行了进一步的验证,并使用显微镜法的检测结果来进行对照。验证显示该方法不仅适用于原毛、面料的检测,也适用于成衣的检到。
2012年,该项目顺利完成了验收,得到*高度评价。后来该项目又获得了上海*总局科技兴检奖二等奖,2014年更是获得中国纺织工业 联合会的纺织之光科技进步二等奖,2014年底,国标委对羊绒羊毛DNA 定呈检测方法也立了项。
据悉,目前,该项目成果在*系统、检测公司、**鉴定等机构中 得到了推广和应用。制成的羊毛羊绒定里试剂盒,在服装的检测监管、企业产品质星控制中发挥了重要作用。
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