双链聚肌胞大众化的检测方法一般采用荧光增强试验、紫外特征吸收光谱试验和磷测定法、沉降系数检查法。这里主要谈一下磷测定法检验双链聚肌胞含量。
定磷法的原理是:在酸性环境中,定磷试剂中的钼酸铵以钼酸形式与样品中的磷酸反应生成磷钼酸,当有还原剂存在时磷钼酸立即转变成蓝色的还原产物—钼蓝。钼蓝在660nm的波长处有较大吸收。
测定供试品中核酸的总磷量,需用硫酸或过氯酸消化成无机磷后再行测定.供试品中总磷量减去无机磷量.即得核酸含磷量,出此计算核酸含量。
对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾2.l95g,置500ml量瓶,加水使溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密量取5ml置500ml量瓶中,加水至刻庋,摇匀(每1ml中含磷l0μg)。
总磷量测定 精密量取供试品溶液1ml.置凯氏烧瓶中,加5mo/L硫酸溶液3.0ml,于l40~l60℃消化2~4小时。俟溶液呈黄褐色后,放冷,加30%过氧化氢1~2滴,继续消化,直至溶液透明。放冷后,加水0.5ml,水浴加热10分钟.放冷,转移至50ml量瓶中,加水至刻度。精密量取此溶液1ml与对照品溶液0.8ml.分别加水2.0ml、定磷试剂(6mol /L盐酸—水—2.5%钼酸破—10%抗血酸1:2:1:1)3ml,摇匀,45℃加热25分钟,立即冷至室温。照分光光度法(中国药典2005年版二部附录ⅣA),在660nm的波长处测定吸收度,计算。
无机磷的测定 精密量取供试品溶液2m}.置离心管中,加沉淀剂(取铝钼酸铵1g,加70%过氯酸l4ml、水386ml使溶解)2.0ml,摇匀,以简每分钟4000转离心15分钟,精密量取此溶液1ml,置25ml量瓶中,加水至刻度,摇匀。精密量取此溶液1ml,照总磷量测定项下的方法,自“分别加水2ml”起,依法测定。
核酸含磷量=总磷量一无机磷量
上面的这个就是检测双链聚肌胞含量的方法--磷测定法,这种方法本身是没有任何问题的,可是如果拿它作为检验双链聚肌胞含量的一方法,我们认为是很不妥的。磷确实是双链聚肌胞的组成部分,但是磷的增加可以有很多途径,有很多的方面可以影响到检测,所以检验双链聚肌胞时要综合考虑各种系数并做好统计,最后得出客观结论。
参考资料 保定和美生物
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